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何时选择荧光报告基因

编辑:广州博鹭腾仪器仪表时间:2018-04-20

报告基因可以让目标分子像黑暗中的萤火虫那样鲜明出众,帮助研究者们检测蛋白和核酸的定位、互作和活性。

报告基因一般分为荧光报告基因和发光报告基因两种类型,发光报告基因包括了化学发光和生物发光。

何时选择荧光报告基因?

在选择报告基因时,首先需要考虑的因素是研究目的。荧光报告基因主要用于研究蛋白质的动态,而化学发光报告基因一般用于基因调控研究。

在进行多重分析时,人们通常选择荧光报告基因。选择可以兼容的荧光蛋白或者改变标记蛋白的荧光基团,就可以实现多重的报告体系。在一些常见的应用中(比如显微镜检测、流式细胞分析和荧光激活的细胞分选),荧光报告基因的多重化能力特别有帮助。而化学发光信号更适合进行群体检测,比如WB、活体成像和多孔板分析。

荧光报告系统非常量,因此最好在多重化的时候将亮度与目标丰度匹配起来,比如对较弱的信号用更亮的染料,Thermo Fisher的资深产品经理Brian Almond说。另外,还要确保荧光之间有足够明显的颜色区别,“在同一个样本中监控几种不同颜色的荧光标记,可以获得意义更加丰富的实验结果,”Almond说。

荧光报告基因也可以用来评估分子间的相互作用,比如荧光共振能量转移及其衍生技术。在邻位连接分析中(比如Sigma-Aldrich的Duolink® assay),两个目标蛋白彼此靠近的时候就会出现荧光。“这种情况只能使用荧光(不能用化学发光)报告基因,因为发光报告基因并适合邻位连接分析所用的显微镜相机,” Sigma-Aldrich公司的应用科学家Carol Kreader说。



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