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何时选择发光报告基因

编辑:广州博鹭腾仪器仪表时间:2018-04-24

报告基因可以让目标分子像黑暗中的萤火虫那样鲜明出众,帮助研究者们检测蛋白和核酸的定位、互作和活性。

报告基因一般分为荧光报告基因和发光报告基因两种类型,发光报告基因包括了化学发光和生物发光。

何时选择发光报告基因?

人们在进行基因表达分析时常会选择化学发光,Kopish说。一个常见例子是,将起调控作用的启动子与荧光素酶配对,然后根据蛋白提取物的荧光强度评估启动子的活性。化学发光报告基因主要用于检测细胞群体的信号(比如微孔板的一个孔),而不是单个细胞。“化学发光(包括生物发光)一般局限于全孔分析,”Kopish说。“更适合作为一种定量工具。”

Sigma的microRNA 检测系统(MISSION® 3’UTR Lenti GoClone™ system)就用到了这种定量发光工具,Kreader说。“他们将LightSwitch萤光素酶融合到数千种miRNA的3’非翻译区。如果miRNA结合,发光信号就会减弱。”这一系统主要用于验证miRNA靶标和研究转录后的基因调控。

除了定量分析以外,发光报告基因还有其他的优势,比如灵敏度高而且背景低。一些生物分子在受到激发时会发出荧光,这种非特异性的自发荧光会干扰荧光报告基因,Almond说。化学发光报告基因“几乎没有背景”,研究者通常在需要扩大信号或者减少背景信号的时候使用它。“化学发光报告基因很适合Western分析和ELISA应用,”Almond说。

因为背景较低,化学发光信号也适合用于组织和小型动物的活体研究,比如进行全身成像。“发光报告基因在动物体内的使用非常成功,这也是因为它们非常灵敏,”Kopish说。“荧光报告基因在动物体内用得不太好,因为光散射、光吸收以及自身荧光会造成很高的背景信号。”


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