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荧光素酶报告基因与绿色荧光蛋白(GFP)有什么区别?

编辑:广州博鹭腾仪器仪表时间:2018-05-18

荧光素酶报告基因与绿色荧光蛋白(GFP)都可以作为报告基因来使用,那么二者有什么区别呢?

1,两者的结果检测方法不同。GFP绿色荧光蛋白,很直观,能够直接检到荧光,在普通的细胞培养条件下都能够观察到,对细胞的生命活动和其他并行的实验安排影响很小。荧光素酶报告基因使用起来比GFP多一个步骤,因为荧光素酶是个酶,不发荧光,发荧光的是它的底物,荧光素。荧光素在哺乳动物细胞里是没有的。所以检测荧光素酶的通常步骤是裂解细胞,释放荧光素酶,与荧光素及其他所需化学物质混合,才得到荧光。现在虽然也有活细胞内检测荧光素酶的手段,但要将荧光素送入活细胞,本身就已要对细胞进行相当的干扰。所以一般来说荧光素酶实验的同一批细胞不适合再做其他并行实验。

2,两者的结果含义不同。GFP如果说是定量检测表达蛋白的话,这个定量只能够指:表达的细胞是多少个,不表达的细胞是多少个。GFP对于单个细胞来说,就有阳性和阴性两种结果罢了。GFP不能够定量地告诉你,这个/群细胞里的表达量是多高还是多低。荧光素酶就能够定量地得到表达量/表达水平的数值,但这个数值是相对于一群细胞来说,而不是对于单个细胞。所以荧光素酶报告基因常用来研究启动子的功能与调控,因为启动子对基因表达的调控可以是渐变的,而不是简单的开和关两种状态。荧光素酶报告基因可以用来量化基因表达的调控。

3,两者的灵敏度不同。GFP本身不能发光,需要488nm蓝光激发才可以发出507nm的绿光。由于容器和溶液中的其他物质也可能会受到激发,因此本底信号较高,使得GFP的灵敏度较低。而荧光素酶则是催化luciferin氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的过程中,会发出生物荧光(bioluminescence)。哺乳动物细胞自身没有荧光素酶,因此使得荧光素酶报告基因实验具有极高的灵敏度,可以检测最低至1020摩尔荧光素酶分子,比Western Blot灵敏度高1000倍以上。

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