荧光素酶报告基因的检测流程

    荧光素酶报告基因的检测流程：

    1、重组质粒制备: 制备含有待检测基因-Luc/Rluc的重组质粒；

    2、细胞系选择: 根据实验需要选择细胞株，通常选择转染效率较高的293T细胞或原代细胞等；

    3、共转染: 将带有Luc/Rluc标记的报告基因和目的基因进行共转染，设置不同的检测时间点，一般为24h/48h；

    4、外界干预: 转染后，可进行物理/化学/病毒等的相应刺激； 

    5、细胞处理: 采用进口/国产双荧光素酶检测试剂盒依照protocol操作； 

    6、荧光检测: 使用GENios Pro 酶标仪或具有类似检测功能的设备进行荧光强度检测。  

    荧光素酶报告基因的优点：

    1、优越的灵敏度，比Westernbloting灵敏度高1000倍以上；

    2、内源性低，哺乳动物无内源性表达； 

    3、荧光素酶检测不受细胞内其他物质影响； 

    4、发光检测，检测方便； 

    5、灵敏度高，10‐20摩尔荧光素酶分子； 

    6、检测范围广，大于7个数量级。