n 产品简介

NLuc萤光素酶是一种经基因工程改造的小分子酶（19.1kDa），是性能卓越的生物发光报告基因蛋白。 它比萤火虫（Photinus pyralis）或海肾荧光素酶亮约 150 倍，使用一种新型的腔肠素类似物（Furimazine） 可产生高强度、辉光型发光信号。该发光反应不依赖 ATP，同时通过抑制本底发光信号而获得最高的检测灵敏度。

NLuc Reporter Gene Assay Kit提供了一种简单的、可单次添加的试剂，具有灵敏度高的特点，它可在 NLuc萤光素酶存在的情况下产生较强信号。

n 保存条件

-20℃保存，有效期一年。NLuc检测底物（50×）建议分装-80℃保存。

Ø 操作流程

1.自备材料
PBS；多道排枪；白色不透光/黑色细胞培养板；化学发光仪或酶标仪。
2.检测前准备
1）预先将NLuc检测底物（50×）和NLuc检测底物缓冲液放置于室温。
2）根据实际使用量，以1:50的比例将适量的NLuc检测底物（50×）与NLuc检测底物缓冲液混匀，室温避光备用。例如：如果需要10ml反应液，则需要加入0.2ml的检测底物。
注：建议现配现用，剩余的含有新型底物的反应液在当次实验结束后不建议留存。
3.操作方法
1）从细胞培养箱中取出细胞培养板，放置5-15min，恢复至室温。
注：使用白色不透光或者黑色的细胞培养板，减少孔间的信号干扰。
2）加入检测溶液
使用多道排枪向每个细胞孔中加入平衡至室温的含有底物的反应液，加样体积与细胞培养液体积相同并混匀。例如，96孔板通常加入80-100ul培养液，相应加入80ul-100ul检测溶液；384孔板通常加入20-30ul培养液，相应加入20-30ul检测溶液。
3）发光检测
混匀后于化学发光仪或酶标仪中检测NLuc荧光素酶报告基因活性。
注：为得到最佳检测结果，请在加入检测试剂后1小时内完成检测。

4.分析数据

（1）实验设计：根据不同实验目的，在每个培养板中都应设置对照组、实验组和空白对照组。为了保证实验准确性，理论上每个实验组（包括对照组）都应当减去空白对照组的萤火虫萤光素酶的发光测量值。

①空白对照组：

背景F：未转染细胞+反应液。

注：空白对照组的样品量必须与实验样品量相同，包含与实验样品相同的培养基/血清组合，并加上完全相同的检测试剂。

②实验组：转染细胞经实验化合物处理（即实验组F）。

③对照组：转染细胞不经处理，用以标准化结果（即对照组F）。

（2）计算结果：

实验组=实验组F-背景F。

对照组=对照组F-背景F。

表达倍数=实验组/对照组。

Ø 注意事项

1. 酶促反应对温度较为敏感，加样检测前务必将所有试剂平衡至室温（20-25℃）再使用；

2. 检测时需使用白色或黑色的96孔板。如果使用普通透明的96孔板，相邻孔之间会产生相互干扰；

3. 检测仪器：能检测化学发光的仪器都适用，但由于不同仪器的设置和灵敏度不同，测得的光信号值也会不同；

4. 单管荧光测定仪测定，每个样品与测定试剂混合后到测定前的时间应保持一致；

5. 为了您的自身安全，实验前请做好有效防护；

6. 本产品仅供科研使用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。