产品规格
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 售价(元) |
通用型外泌体纯化试剂盒（SEC法） | EXP001 | 1 T | 800 |
EXP002 | 5 T | 3400 |
产品简介
外泌体是由活细胞分泌的具有生物活性的膜结构物质，直径在50-150nm左右，并且不能自行复制的具有脂质双分子层的小囊泡。外泌体广泛分布于细胞上清，血液，尿液，脑脊液，唾液，滑液，羊水，牛奶中，在植物与细菌中也有分布。外泌体含有多种蛋白质、脂类、DNA和RNA等物质，在细胞间通讯、物质运输和免疫调节等方面发挥着重要作用。
通用型外泌体纯化试剂盒是一款基于尺寸排阻色谱法（SEC法）原理的外泌体纯化试剂盒，原理是当颗粒进入多孔多糖树脂时，更小的颗粒被困在孔隙中，它们从柱子中出来的时间被延迟。当液体流出柱子时，连续收集馏分。颗粒根据大小不同分布在各个馏分中，较大的颗粒先离开柱子，较小颗粒，蛋白等小分子后离开柱子。颗粒不与树脂发生化学结合，保证分离稳定性和可重复性。该试剂盒具有快速、高效、获得的外泌体纯度高，形态完整等特点，可用于电镜分析、NTA粒径分析、核酸分析、蛋白分析、细胞学实验和动物实验等。
本试剂盒适用于血浆血清、细胞上清、尿液、唾液和脑脊液等澄清度高的非复杂生物样本，包含配套的SEC纯化柱，纯化滤管，浓缩超滤管及再生液。本试剂盒在细胞上清液样品中达到外泌体回收率高达91%，杂蛋白去除率99.24%。
产品组成
组分名称 | 1T 规格（EXP001） | 5T 规格（EXP002） |
SEC纯化柱(Exosome Purification Column) | 1 T | 5 T |
清洗再生液 | 80 mL | 400 mL |
外泌体纯化滤管（Exosome Purification Filter） | 5 T | 25 T |
15 mL超滤管（10KDa） | 1 T | 2 T |
注： SEC纯化柱(Exosome Purification Column)经过处理及正确保存可重复使用，外泌体纯化滤管（Exosome Purification Filter）不可重复使用。
保存条件
常温运输存储，有效期 1 年。
使用方法
需自备试剂和耗材：
（1）试剂：①无菌1×PBS溶液（0.22 μm 滤膜过滤）；②填料保存液：20%乙醇（超声脱气，或配置后静置过夜）；③去离子水（0.22 μm 滤膜过滤）
注：以上试剂使用前需平衡到室温。
（2）简单装置及耗材：①重力纯化柱支架或铁架台；8只馏分EP收集管：1.5 mL EP管
一．样本预处理：
细胞上清：
（1）收集细胞上清10-50 mL，对细胞上清液离心（4000 xg，10 min），弃沉淀保留上清液；
（2）上清液使用0.22 um滤膜过滤；
（3）过滤后用15 mL超滤管进行浓缩，浓缩体积比为1:20—1:50，收集浓缩液备用（试剂盒配备有10KDa超滤管，超滤管使用方法见本司超滤管产品官网）。
注：上样样品体积为0.5 mL样本，过柱纯化过程会对样本进行一定的稀释，因此应尽量保证样品中有足够多的囊泡，推荐上样样品BCA蛋白浓度大于5 mg/ml（建议使用外泌体专用无血清培养基，提高细胞上清中外泌体的含量）。
尿液：
（1）采集中段晨尿约10-50 mL，对尿液离心（4000 xg，10 min），弃沉淀保留上清液；
（2）上清液使用 0.22 um 滤膜过滤；
（3）过滤后用 15 mL超滤管浓缩，浓缩体积比为1:20—1:50，收集浓缩液备用。
二．外泌体分离
（1）柱平衡：若柱保存在4℃，室温放置30 min，置于重力柱支架上（自备），柱下部放置废液收集烧杯。实验前确保SEC柱子处于室温后再打开顶部柱塞和底盖，将管中保存液排空至底部出口无液体流出，向柱中加入15mL 无菌PBS洗涤填料（可分次加入），可让液体全部流出。
（2）上样：底部无液体流出时加入0.5 mL样品（样品不足0.5 mL用PBS稀释混匀补足），让样品全部进入筛板。
（3）空隙体积：当样品全部进入筛板，底部无液体流出后加入2.5 mL PBS等待PBS流过直至无液体流出，此过程底部流出0.5 mL+ 2.5 mL的体积为空隙体积（可丢弃的洗脱液）
（4）收集外泌体馏分：上步骤底部液体完全流出后，加入0.5 mL PBS，使用EP管收集流出液，收集体积为0.5 mL，标记为馏分1。馏分1完全流出后再加入0.5 mL PBS，收集流出液为馏分2。重复此步骤收集4个馏分（每一次收集需等待上一个馏分完全流出后才能加PBS），纯度最佳为前3个馏分即1.5 mL 体积，高回收率推荐合并前4个馏分即 2mL 体积。
（5）过滤或浓缩外泌体：将收集的外泌体馏分转入 Exosome Purification Filter管（EPF）中，于以4000 xg离心 10 min，离心后收集EPF管底的液体，此液体即为过滤的外泌体（注：EPF管不可重复使用）；如需要，可使用超滤管对收集产物进行进一步浓缩富集。
三．SEC柱清洗再生和储存
（1）柱再生：收集到所需体积后，用10 mL 再生液进行清洗，再用20 mL PBS 清洗，随后可进行第二次上样。
（2）柱储存：如果要储存以备将来使用，先用10 mL 再生液进行清洗，再依次用 20 mL PBS、20 mL去离子水20 mL的20%乙醇清洗，清洗结束后盖上底盖，倒入保存液（20%乙醇），盖上顶盖密封可置于4 ℃或常温储存。
注：再生液为碱性，避免再生液清洗后直接添加去离子水或 20%乙醇来平衡纯化柱，防止树脂床内的盐沉淀并损坏柱，去离子水清洗可进一步洗去平衡过程中产生的盐，防止盐与 20%乙醇直接接触产生结晶。
结果展示：
图1：纯化过程每0.5mL馏分NTA外泌体颗粒浓度，及馏分BCA蛋白浓度
图2：纯化后外泌体TEM 图及外泌体WB实验结果图
注意事项
1．为了您的自身安全，实验前请做好有效防护。
2．为避免色谱柱中过滤器堵塞，建议对其他粘度较高的的生物样品进行过滤或离心处理，以去除较大的颗粒物。
3．当外泌体馏分用于后续高通量测序或者其他组学分析时，为避免交叉污染，建议使用新柱。
4．请注意使用过程中勿将柱子从高处摔落或摔打导致柱床碎裂，洗脱过程避免柱内液体流尽后，填料干放时间过长。
5．柱再生过程中不可避免会产生盐，盐沉淀影响填料性能，每根柱子重复使用次数建议不超过5次。
6．再生液为碱性，具有一定腐蚀性，请务必小心使用，做好实验防护，若沾到皮肤请用大量水清洗。
7．本产品仅供科研使用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内！