产品规格：

 产品简介：

本产品用于NanoLuc或NanoBiT报告基因的活细胞检测，检测时长可维持数小时或数天。该底物由细胞酯酶催化，发生缓慢的酯水解反应生成呋喃嗪，由于酯水解反应速率较为缓慢，因此整个实验过程中呋喃嗪稳定释放，进而被NanoLuc或NanoBiT荧光素酶持续催化发光。通过仪器测定发光信号可实现活细胞的动态检测。

 保存条件：

-20℃或-80℃避光保存，6个月有效。

 使用说明：

细胞制备：

贴壁细胞

1. 在白色96孔板中接种表达NanoLuc或NanoBiT荧光素酶的细胞。

2. 将含有细胞的孔板放入 37℃，5% CO₂ 培养箱，过夜孵育。

悬浮细胞

1. 在白色 96 孔组织培养板）中将表达 NanoLuc 或 NanoBiT 萤光素酶的细胞铺板。

注意：

1. 对于多天的发光测量，如果细胞在整个实验过程中生长，请以低细胞密度对贴壁细胞进行铺板。

2. 对于瞬时表达和多日发光测量，建议使用批量转染方案，然后重新铺板。

3. 整个板的热梯度将是孔间差异的来源。

4.为了尽可能减少蒸发或热梯度的影响，建议仅使用 96 孔板内部的 60 个孔，并添加 200μL无菌培养基或 PBS 至外部的 36 个孔，添加 100μL 无菌培养基或 PBS 至孔间。

5. 建议使用缓冲培养基，这有助于在整个实验中保持生理pH值，培养基中可添加小于10% v/v浓度的FBS，但添加后会增加自发光。

底物添加：

1.在细胞培养基中将底物稀释 100 倍，并混合。若发光检测仪不带有 CO₂ 控制，建议使用缓冲培养基，这有助于在整个实验过程中保持生理 pH 值。

2.对于贴壁细胞，从组织培养板中吸出培养基，并替换为步骤1中的溶液。对于悬浮细胞，以130×g离心10分钟收集细胞沉淀，然后使用步骤1中的溶液重悬细胞沉淀。

3.在37℃下孵育，以在培养基中积累 Furimazine，可以通过在 37℃下持续测量发光信号，以确定达到足够信号强度 / 稳定性的时间，通常底物大约需要2小时达到信号峰值。

4.添加测试化合物和进行对照处理。

 注意事项：

1．本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

2．为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

实验数据：