产品规格
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 售价(元) |
膜特异性外泌体富集试剂盒（细胞上清磁珠法） | EXP013 | 2 T | 800 |
EXP014 | 10 T | 3500 |
产品简介
外泌体是由活细胞分泌的具有生物活性的膜结构物质，直径在50-150nm左右，并且不能自行复制的具有脂质双分子层的小囊泡。外泌体广泛分布于细胞上清，血液，尿液，脑脊液，唾液，滑液，羊水，牛奶中，在植物与细菌中也有分布。外泌体含有多种蛋白质、脂类、DNA和RNA等物质，在细胞间通讯、物质运输和免疫调节等方面发挥着重要作用。
膜特异性外泌体富集试剂盒（细胞上清磁珠法）采用独特的分离技术特异性识别外泌体的膜结构，脂质探针靶向捕获外泌体，再通过与磁珠孵育从细胞上清中收集外泌体，快速从细胞上清中获得大量完整的外泌体颗粒，清洗后获得磁珠-外泌体的复合体，可直接裂解用于下游蛋白分析。
本试剂盒专用于细胞上清液样本，不适用于血清血浆，脑脊液，尿液等样本。
产品组成及保存条件
组分 | 组分名称 | 2T规格（EXP013） | 10T规格 （EXP014） | 主要功能 | 保存条件 |
组分A | 脂质探针 | 3.2 μL | 16 μL | 膜特异性抓手 | -20~-25 ℃，有效期6个月，使用前混匀 |
组分B | 脂质探针稀释剂 | 8 mL | 40 mL | 稀释试剂 | 2~8 °C避光保存，有效期一年 |
组分C | 磁珠 | 0.4 mL | 2.0 mL | 富集外泌体 | 2~8 ℃，有效期一年，不可使磁珠脱离磁珠保护液，使用前混匀 |
组分D | 磁珠清洗液 | 6 mL | 30 mL | 清洗液 | 2~8 °C保存，有效期一年 |
组分E | 外泌体清洗液 | 6 mL | 30 mL | 清洗液 | 2~8 °C保存，有效期一年 |
注：脂质探针和磁珠组分需要摇匀混合后再使用。
使用方法
需自备试剂和耗材：
（1）试剂： 1×PBS溶液
（2）装置及耗材：① 4 °C摇床或者旋转混匀仪；②磁力架；③离心机；④15 mL EP管；1.5 mL EP管
1.样本预处理:
1) 取2 mL的细胞上清，800 g，常温离心5 min；
2) 吸取离心后的上清，2000 g，常温离心10 min；
3) 吸取离心后的上清，12000 g，4℃离心20 min；
4) 取上清于新的15 mL 离心管中，4℃备用。
2.探针孵育:
以2 mL细胞上清为例，按照相应比例加入相对应的试剂用量。
组分名称 | 试剂体积 |
脂质探针 | 1.6 μL |
脂质探针稀释剂 | 4 mL |
磁珠 | 0.2 mL |
注：此体系可纯化2 mL的细胞上清液样本，为最佳分离效率体系及比例，可以按比例增加细胞上清液处理量，但外泌体的分离效率略有下降。
1) 取4 mL的组分B脂质探针稀释剂于15 mL的离心管中，加入1.6 μL的组分A脂质探针，震荡混匀，即为AB混合液；
2) 将2 mL的细胞上清液加入组分A与组分B的混合液中，上下颠倒15次，4 ℃摇床（40 rpm左右）或旋转混匀仪（15 rpm左右）孵育60 min，即为细胞上清与组分AB的混合液。
3.准备磁珠:
1) 吸取0.2 mL磁珠(使用前先震荡混匀)于新的1.5 mL的离心管中，于磁力架中静置3 min。
2) 吸弃上清液，加入1 mL的组分D磁珠清洗液，震荡混匀，置于磁力架上静置3min，再重复清洗一次。
4.磁珠捕获:
1) 吸弃磁珠清洗液，取1 mL细胞上清与组分A，B的混合液加入其中，轻轻重悬磁珠，重悬后吸回离心管，于室温摇床（65 rpm左右）或者旋转混匀仪（25 rpm左右）孵育60 min；
5.磁珠捕获后清洗:
1) 向上步骤的磁珠沉淀加入组分E外泌体清洗液1 mL，于磁力架上静置3 min，吸弃上清液清洗，重复清洗两次。
2) 吸弃上清后，向管中加入20 μL PBS，震荡后的溶液即为含有外泌体的磁珠溶液，可保存于-80 °C的冰箱中，以备后续实验。
注意事项
1．为了您的自身安全，实验前请做好有效防护。
2．清洗后获得的为磁珠-外泌体的复合体，可直接裂解用于下游蛋白分析，但其他表征如NTA或TEM 分析会受到影响。
3．本产品仅供科研使用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内！