试剂产品

产品规格

产品简介

DNA 片段分选纯化磁珠基于SPRI (Solid Phase Reversible Immobilization )原理，采用高结合能力、快速磁响应力、低沉降速度的纳米磁珠和特制的缓冲液体系，可用于核酸纯化，也可通过不同的加样比例从混合核酸样本中分离纯化出目标大小范围内的核酸片段，整个操作过程安全，方便快速，回收率高，质量稳定可靠，其回收的核酸片段可用于二代测序平台的文库构建。

  本产品适合于回收 100 bp-10kb 片段范围内的纯化和分选，可手工实验操作，也可应用在基于自动化移液工作站的高通量实验操作，可完美替代 Beckman AMPure XP。

保存条件

2-8 °C保存，有效期18个月；

使用方法

自备仪器和试剂

1)      80%(V/V)乙醇溶液（最好使用新鲜配置的）；

2)      洗脱缓冲液：TE Buffer（10 mM Tris-HCl, pH 8.0，1 mM EDTA）或去离子水；

3)      漩涡振荡器；

4)      磁性分离器：可选用96孔磁性分离器；

注：DNA样本体积需≥50 μL。过小的体积会降低移液的准确度，从而影响筛选范围的准确度；提前半小时将 DNA片段筛选试剂从 4 ℃取出，使其温度平衡至室温.

1. 核酸纯化：回收大于 100 bp 的全部核酸

  1)  将平衡至室温的DNA样本，涡旋充分混匀，取待纯化样本体积 1.8倍的试剂加入样本中（例如待纯化样本 50 μL，加入试剂 90 μL），涡旋或用吸头反复吹吸混匀，室温静置 10 min；注：样本量×比率=磁珠悬液加入量，如50 μL样本×1.8=90 μL磁珠悬液。

  2) 置于磁力架上 2 min 或至溶液澄清，用移液器吸去上清（避免吸到磁珠）；

  3) 去掉磁力架，加入 200 μL 80% 乙醇，涡旋或用吸头反复吹吸重悬磁珠；置于磁力架上至溶液澄清，用移液器吸去上清（避免吸到磁珠），重复操作二次；最后一次用 10 μL 吸头吸去多余上清（避免吸到磁珠）注：最后一次洗涤后应尽可能移除干净洗涤液；

  4) 将离心管置于磁力架上，室温开盖晾干约 3 min；注：过度干燥磁珠会导致回收率降低，表面有裂纹即代表干燥过度；

  5) 去除磁力架，加入10 ~ 50 μL去离子水或 TE Buffer 反复吹打数次，充分混匀重悬磁珠，室温静置 5 min；再将离心管置于磁力架上2min至溶液变澄清，将上清液转移至新的离心管中，可直接用于后续研究或者短暂保存可置于 4℃，长期保存置于 -20℃。注：用户可以根据实验需要调整洗脱液体积。

2. 片段分选

根据所需目的片段的分布范围，按下表进行两轮纯化，第一轮用磁珠去除目标范围外的大片段，第二轮补加对应体积的试剂，让磁珠与目标范围内的核酸结合，从而分离出特定片段大小范围的核酸。

0.60×/0.80×为例的操作步骤

1)      将平衡至室温的DNA样本，涡旋充分混匀，取待纯化样本体积 0.6倍的试剂加入样本中（例如待纯化样本 50 μL，加入试剂 30 μL），涡旋或用吸头反复吹吸混匀，室温静置 10 min；注：第一次磁珠加入量：样本量×比率=磁珠悬液加入量，如50 μL样本×0.6=30 μL磁珠悬液。

2)      置于磁力架上 2 min 或至溶液澄清，用移液器吸去上清（避免吸到磁珠）

3)      取样本体积 0.2 倍的试剂（例如起始待纯化样本 50 μL，加入试剂 10 μL），加入步骤 2 上清中，涡旋吹吸混匀，室温静置 10 min。注：第二次磁珠加入量：样本量×比率=磁珠悬液加入量，如50 μL样本×0.2=10 μL磁珠悬液。

4)      去掉磁力架，加入 200 μL 80% 乙醇，涡旋或用吸头反复吹吸重悬磁珠；置于磁力架上至溶液澄清，用移液器吸去上清（避免吸到磁珠），重复操作二次；最后一次用 10 μL 吸头吸去多余上清（避免吸到磁珠）注：最后一次洗涤后应尽可能移除干净洗涤液；

5)      将离心管置于磁力架上，室温开盖晾干约 3 min；注：过度干燥磁珠会导致回收率降低，表面有裂纹即代表干燥过度；

6)      去除磁力架，加入10 ~ 50 μL去离子水或 TE Buffer 反复吹打数次，充分混匀重悬磁珠，室温静置 5 min；再将离心管置于磁力架上2min至溶液变澄清，将上清液转移至新的离心管中，可直接用于后续研究或者短暂保存可置于 4℃，长期保存置于 -20℃。注：用户可以根据实验需要调整洗脱液体积。

注意事项

  1) 磁珠悬液应在2 ~ 8℃ 保存与运输，在保存过程中应严格避免冷冻、离心等操作。

  2) 建议使用质量好的移液器吸头和反应管，避免因粘附磁珠及溶液而造成损失，从磁珠保存管中移取磁珠前应充分震荡重悬均匀。

  3) 磁珠洗脱前应彻底去除洗涤液，避免残留乙醇影响 DNA洗脱效率。

  4) 请勿长时间干燥磁珠，以免引起不可逆的磁珠聚集以及降低核酸洗脱效率。

  5) 样本与加入试剂的体积比直接影响目标片段的分选结果，加入试剂前建议用移液器等确认样本体积。

  6) 样品中pH，其他盐离子，PEG等成分，会影响最终片段分选效果。如按建议筛选比率，需是不含影响筛选成分的，例如溶解在超纯水、Tris、TE等。其他溶液，可根据具体情况进行筛选比率的调整。

  7) 为了您的自身安全，实验前请做好有效防护；

  8) 本产品仅供科研使用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内！