产品规格
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 售价 |
胶原酶IV（Collagenase IV） | CG-CIV001 | 100 mg | 380 |
CG-CIV002 | 500 mg | 1780 |
CG-CIV003 | 1 g | 3480 |
产品简介
胶原酶IV ( Collagenase IV) 来源于溶组织梭菌 (Clostridium histolyticum )，是一种蛋白酶，能够特异性的识别 Pro-X-Gly-Pro 序列并切割该序列中性氨基酸 (X) 和甘氨酸 (Gly) 之间的肽键，并且这种序列在胶原中出现的频率很高。该胶原酶产物是由溶组织梭菌所分泌的酶混合物组成，主要的成分是两种胶原酶、梭菌蛋白酶和一种中性蛋白酶和低胰蛋白酶，可以降解广泛存在于结缔组织中的具有三股螺旋的天然胶原纤维的蛋白酶，在生物学研究中具有广泛的用途，它可用于制备分离的细胞悬浮液。该产品适用于人类肿瘤、小鼠肾脏、人类成人和胎儿脑、肺和许多其他上皮组织的解聚。它还被证明可有效用于肝脏和肾脏灌注研究、胰腺消化、非实质大鼠肝细胞的分离以及肝细胞的制备。
胶原酶主要根据胶原酶活性的差异，分为四种类型：胶原酶I型，II型，III型和IV型，在应用上有所偏向：1）胶原酶I（Collagenase I）：含有比较均匀的各种酶活力（包括胶原酶，酪蛋白酶，梭菌蛋白酶，胰蛋白酶活性）。通常用作上皮细胞、肝、肺、脂肪和肾上腺组织细胞的制备; 2）胶原酶II（Collagenase II）：含有更高的梭菌蛋白酶活性，通常用于心脏、骨、肌肉、胸腺和软骨等组织来源细胞的制备; 3）胶原酶III（Collagenase III）：含有较低的蛋白酶活性，常用于乳腺细胞的制备; 4）胶原酶IV（Collagenase IV）：含有低胰酶活性，通常用于胰岛细胞的制备，或者需要维持受体完整性的细胞制备实验。
本品为 IV 型胶原酶( Collagenase IV)，≥125 U/mg solid，具有低胰酶活性，特别适用于胰岛细胞制备。
保存条件
冻干粉状态，2-8 °C避光保存，有效期2年；储存液-25~-15°C避光冻存，避免反复冻融；
使用方法
一. 酶活力单位
1个酶活力单位指在 37 ℃，pH 7.5 的条件下，5 h内水解胶原产生1 μmol/L 亮氨酸所需的酶量；本品≥125 U/mg solid
二. 生化/生理作用
每摩尔胶原蛋白酶被4g原子钙活化，可被乙二醇-双（β-氨基乙基醚）-N，NN′,N′-四乙酸，β-巯基乙醇、谷胱甘肽、巯基乙酸和8-羟基喹啉抑制。
三. 使用示例
1，胶原酶储存液的配制
1) 向每管100 mg 的胶原酶中加入1 mL 的相应缓冲液（根据特定的实验条件或者参考相应的文献资料确定），如 HBSS (Hank's 平衡盐 溶液，含 Ca2+ 、Mg2+ ) 等，轻轻旋涡震荡使其充分溶解，制备成 100 mg/mL ( 即 100×) 的储存液。
2) 用低蛋白结合性的 0.22 μm 的滤膜过滤除菌，分装成小份量，于 -20 ℃避光冻存。使用前于冰上解冻，避免反复冻融。其用于组织和细胞分散的常用浓度为：0.5~2.5 mg/mL，用于软骨消化的常用浓度为 1~2 mg/ mL，需要根据特定的实验条件或者参考相应的文献资料确定所需的最佳工作浓度。
2，组织的分离
1) 使用无菌手术刀或剪刀将组织切成 3~4 mm 大小的组织块；
2) 使用相应缓冲液（如 HBSS ）洗涤组织块数次；
3) 加入足量的缓冲液，使其浸没组织块，并加入胶原酶至需要的工作浓度；
4) 于 37 ℃孵育 4~18 h，消化时使用水平摇床以及用 3 mM 的 CaCl2 补充消化可以提高消化效率；
5) 已分散开的细胞可使用不锈钢或尼龙网筛筛得，收集备用。未完全解离的组织另外添加适量的新鲜胶原酶工作液于37 ℃继续孵育；
6) 使用不含胶原酶的缓冲液洗涤收集的细胞数次；
7) 细胞培养液重悬上述细胞，利用自动细胞计数器或其他方法计算活细胞密度；
8) 于细胞培养皿上利用合适细胞培养基接种细胞。
3，器官灌注
1) 37℃预热的相应缓冲液（如 HBSS）中加入胶原酶，另添加 3 mM 的 CaCl2 有助于提高分离效率；
2) 按照已优化的速率对相应的器官灌注胶原酶工作液；
3) 将上述过程中回收的灌注液流经不锈钢或尼龙网筛，从而将已解离的细胞或小片段组织块与较大团块分离开来，未充分解离的组织 需利用新鲜胶原酶工作液于 37℃进一步孵育；
4) 使用不含胶原酶的缓冲液洗涤收集的细胞数次；
5) 使用细胞培养液重悬上述细胞，利用自动细胞计数器或其他方法计算活细胞密度；
6) 于细胞培养皿上利用合适细胞培养基接种细胞。
注意事项
1) 为了您的自身安全，实验前请做好有效防护；
2) 本产品仅供科研使用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内！