¢ 产品规格

¢ 产品简介

   BCA (Bicinchoninic acid) 法是目前应用比较广泛的蛋白质浓度测定方法。基于双缩脲反应，即在碱性环境下蛋白质将Cu2+还原成Cu+，Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物，在562 nm处有高的吸光值，该反应产物的量与蛋白质浓度成正比。测定其在562 nm处的吸光值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。该方法快速灵敏、稳定可靠且对不同种类蛋白质变异系数很小。试剂盒中提供了浓度稳定的蛋白标准品用于制作标准曲线。

   BCA 蛋白定量试剂盒可用于试管法检测，也可用于微孔板法检测。试管法需较大量蛋白样品(100 μL)和工作液(2 mL)，蛋白样品与 BCA 工作液的比率为1:20(v/v)，蛋白质测定范围为20-2000 μg/mL，采用加强法可以检测到 5 μg/mL；微孔板法操作简单方便，仅需少量(10-25 μL)的蛋白样品和工作液(200 μL)，蛋白样品与工作液的比率为1:20(v/v)或者1:8(v/v），蛋白质测定范围为 20-2000 μg/mL，采用加强法可以检测到 5 μg/mL。

本试剂盒，含预配制标准品，无需繁琐稀释操作。使用比色皿法可进行 50 次检测，使用酶标法可进行 500 次检测。

¢ 保存条件

常温运输。4℃保存，有效期12个月。

¢ 使用说明

一、配制工作液

1. 配制 BCA 工作液

(1) 计算所需要的总 BCA 工作液体积。总 BCA 工作液体积=（标准品数量+待测样品数量）x 重复数 x 每个样品所需要的 BCA 工作液。

注：试管法检测时每个样品加 2.0 mL BCA 工作液，微孔板检测每个样品加 200 μL BCA 工作液。 

(2) 配制 BCA 工作液：50 体积的 BCA 试剂 A 中加入 1 体积的 BCA 试剂 B（A:B=50:1），充分混匀。

注：BCA 工作液装入密封容器内，室温条件 24h 稳定。 

二、检测方法

1. 试管检测方法（样品:BCA 工作液=1:20） 

(1) 各取 100 μL 标准品和待测样品加入到反应管中。

(2) 每管加入 2.0 mL BCA 工作液，混匀。根据待测样品的浓度范围选择孵育时间和温度。

标准孵育方法：37℃ 孵育 30 min 或者室温 2h；增强孵育方法：60℃ 孵育 30 min。

注：BCA 检测蛋白浓度，延长孵育时间会加深颜色反应。升高温度会加快显色反应，但是温度升高和时间延长会降低检测下限，以及降低工作线性范围。若蛋白浓度很低，可在较高温度孵育或者适当延长孵育时间。 

(3) 冷却到室温。在分光光度计上进行检测，设定波长为 562 nm，在 10 min 内对所有样品读数。

注：由于 BCA 反应达不到真正的反应终点，即使温度降低至室温生色反应液会继续。但是，由于室温下生色比率相当低，因此若是 10 min 内能对所有的样本进行 562 nm 吸光度的测试，不会导致明显错误。 

(4) 根据 BSA 标准品的吸光度（减去标准品中空白孔的 OD 值即最终的读数），绘制标准曲线（X-蛋白浓度μg/mL；Y-最终的 OD 562nm）。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。

2. 微孔板检测方法（样品: BCA 工作液=1:20）

(1) 各取 10 μL 标准品和待测样品加入到微孔板中。

注：样品与工作液比例为 1:20，检测范围为 125-2000μg/mL。若样品浓度非常低，可使用 25μL 标准品和待检测样品进行检测（即 1:8），这时试剂盒的检测范围为 20-2000 μg/mL。 

(2) 每孔加入 200 μL BCA 工作液，枪头吹打充分混匀。盖上微孔板，37℃ 孵育 30 min。

(3) 冷却到室温，在酶标仪上的 562 nm 波长范围处检测吸光度。

(4) 根据 BSA 标准品的吸光度（减去标准品中空白孔的 OD 值即最终的读数），绘制标准曲线（ X-蛋白浓度μg/mL；Y-最终的 OD 562nm）。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。

¢ 注意事项

1. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

3. 对样品进行适度稀释，可设置 2 倍、4 倍、8 倍等多个梯度，稀释液是去离子水或者 PBS。

4. 若测定标准曲线时无梯度变化，表明存在 BCA 法检测干扰物。