试剂产品

产品规格

产品简介

Protein A琼脂糖磁珠(10-30 μm)是一由NHS活化的超顺磁性微球与Protein A共价结合形成的复合微粒琼脂糖磁珠，与同类产品相比，该产品具有更高的抗体结合能力和较低的蛋白非特异吸附率，洗脱条件更均一，一步纯化即可从血清样品中分离出纯度大于90%的抗体。

本产品为微米级10-30 μm的磁性微球，熟练操作可在15 min内完成抗体吸附过程，30 min内完成抗体纯化流程。本产品可重复使用，适用于血浆、腹水、组织培养上清液等样品中的抗体纯化，也可用于抗体固定及其它相关研究.

产品组合及保存条件

注：磁珠蛋白结合量与目标蛋白特性有关，此处仅做参考值；悬浮浓度10 %指1 mL磁珠悬液中包含100 µL磁珠；磁珠使用和保存过程中应避免冷冻、干燥和高速离心等操作

使用方法

以纯化人血清 IgG 为例的操作步骤：

1.缓冲液准备:

以下提供的缓冲液体系适用于Protein A/G琼脂糖磁珠纯化抗体，供用户参考。

结合洗涤液： PBST (pH 7.2~7.4): 137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na₂HPO₄, 2.0 mM KH₂PO₄, 0.1% Tween-20

洗脱液： 100 mM Gly, 0.1% Tween-20, pH 2.0

中和液： 1.0 M Tris-HCl, pH 9.0

保存液： PBST, 0.1% (V/V) Proclin 300

2.操作步骤:

(1) 样本处理：取人血清100 µL至 1.5 mL EP 管中，接着加入900 µL结合洗涤液，充分混匀。

(2) 磁珠预处理：将抗体纯化磁珠漩涡振荡30 s，使磁珠充分重悬；取200 µL 10%（V/V）磁珠悬液置于另一新的1.5 mL EP 管中。对磁珠悬液进行磁性分离，弃上清液，用1 mL 结合洗涤液洗涤2次，磁性分离，管中磁珠可直接用于抗体分离。

注：该步骤磁珠的用量可根据磁珠对目标抗体的最大结合量进行调节，当目标抗体的浓度大于 150 µg/mL时，用户可取1.2~1.5 倍磁珠用量（计算方式：如1.5*样品中目标抗体含量/磁珠最大结合量），若目标抗体浓度过低，如低于70 µg/mL 时，客户为了提高抗体回收率，可增加磁珠用量，如提高至3倍磁珠用量。

(3) 抗体吸附：处理好的磁珠加入处理好的样本溶液，漩涡振荡均匀，在室温下，置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转EP管，促使样品和磁珠充分接触并吸附，翻转约15 min后进行磁性分离，移弃上清液。

(4) 磁珠洗涤：向EP管中加入1 mL结合洗涤液，振荡重悬磁珠后进行磁性分离，移弃上清液；重复此步骤3 次。

(5) 抗体洗脱：在上述完成磁珠洗涤的EP管中加入0.5~1.0 mL洗脱液，用移液器吹打或者涡旋震荡下迅速重悬，在室温下，置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转EP管，翻转10 min后进行磁性分离，收集上清液至新的EP管。

注：该步骤洗脱液用量，建议客户使最终洗脱的抗体浓度控制在 0.6~1.2 mg/mL，此时第1次洗脱条件中95%以上的抗体将被洗脱下来；若洗脱液用量过少，会导致部分抗体在第1次洗脱时仍然留在磁珠上，从而导致抗体回收率降低。

(6) 抗体中和：在步骤（5）抗体洗脱液中加入一定量的中和液，一般为抗体洗脱体积的1/10，最终使洗脱的抗体pH 值保持中性环境，以利于维持抗体的生物活性，避免抗体失活。

(7) 磁珠后处理：使用后的磁珠用洗脱液洗涤2次，磁性分离，弃上清液；接着用结合洗涤液洗涤3次，磁性分离，弃上清液，加入200 µL保存液重悬磁珠，置于2~8 ℃保存。

(8) 磁珠再生：磁珠多次使用后会有沉淀蛋白、强疏水性蛋白、脂蛋白等杂质非特异性吸附到磁珠上，为了保证磁珠的使用效率，建议持续使用5次后进行磁珠再生处理。

按约每1 mL 10%（V/V）磁珠加入1 mL 1%（V/V）Triton X-100 磁珠再生缓冲液，振荡均匀，在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转混合，10 min 后进行磁性分离，弃上清液，立即加入1 mL 结合洗涤液进行重悬，然后磁性分离，弃上清液，重复该操作3次；最后加入1 mL 保存液 重悬磁珠，置于2~8℃保存。

注意事项 

（1）为了您的自身安全，实验前请做好有效防护。

（2）在使用本产品前，请务必充分振荡使磁珠保持均匀的悬浮状态；磁珠与溶液混合过程中，如果溶液粘稠无法通过翻转离心管重悬磁珠，可采用移液器（质量好的移液器吸头和离心管，以免磁珠贴壁或混合过程发生渗漏引起磁珠的损耗）反复吹吸或短时漩涡混合使磁珠充分重悬。

（3）本产品可以重复使用，当纯化性能降低时，建议进行再生处理；

（4）本产品仅供科研使用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内！