产品规格

产品简介

萤火虫荧光素酶（Firefly luciferase）是一种分子量约为 61 kDa 的蛋白，在 ATP、镁离子和氧气存在的条件下，能够催化荧光素（luciferin）氧化成 oxyluciferin，在 luciferin 氧化的过程中会发出波长为 560 nm 左右的生物荧光，该荧光可通过化学发光仪进行测定。Firefly Luciferase reporter gene Assay Kit 具有灵敏度高的特点，可以高灵敏地检测萤火虫荧光素酶在哺乳动物细胞中的表达。

本产品是一种辉光型定量检测试剂盒，具备高通量检测荧光素酶在哺乳动物细胞中的表达。本试剂盒相较于传统闪光型试剂盒相比，对组分进行了优化，提高了发光信号的稳定性，使信号半衰期延长至2h左右（22℃环境下），为实验设计提供了更大的灵活性。

保存条件

-20℃避光保存，有效期6个月。萤火虫荧光素酶检测试剂建议分装于-20 ℃或-80 ℃避光保存，避免反复冻融，在-20 ℃可保存数月，在-80 ℃中可保存一年。

产品内容

使用方法

1.裂解细胞：将细胞裂解液恢复室温后，按如下方式加入细胞裂解液，充分裂解细胞。

（1）对于贴壁细胞：吸尽细胞培养液后，参考下表加入适量的细胞裂解液；

对于悬浮细胞：离心去上清后，参考下表加入适量细胞裂解液。冰上孵育5-10 min，充分裂解细胞。

注：裂解产物可室温保存6 h；4 ℃保存18 h；-80 ℃可保持数月（裂解产物不能多次反复冻融），本试剂盒裂解液数量按照24孔板添加量进行配制。

（2）充分裂解后，10000-15000 rpm离心1 min，取上清用于测定。（选做）

2.在加样前提前设置好仪器参数：按仪器操作说明书开启化学发光仪或具有检测化学发光功能的多功能酶标仪，可以设定参数为测定时间0.5-2 sec，或者根据仪器设备的要求并根据实验需要设置适当的间隔时间和测定时间。

3.每个样品测定时，取20 μL-100 μL裂解液加入黑色96孔板中（需保持每次样品的加样量一致，若细胞的表达量较高则取20 μL用作测试，若细胞的酶表达量较低，则可以取更大量裂解液用作测试），取等体积的细胞裂解液作为空白对照，然后加入100 μL萤火虫荧光素酶检测试剂，充分混匀后测定RLU（Relative light unit）。

注：请勿将萤火虫荧光素酶检测试剂在室温下放置超过2小时。

4.分析数据

（1）实验设计：根据不同实验目的，在每个培养板中都应设置对照组、实验组和空白对照组。为了保证实验准确性，理论上每个实验组（包括对照组）都应当减去空白对照组的萤火虫荧光素酶的发光测量值。

①空白对照组：

背景F：未转染细胞+萤火虫荧光素酶检测试剂。

注：空白对照组的样品量必须与实验样品量相同，包含与实验样品相同的培养基/血清组合，并加上完全相同的检测试剂。

②实验组：转染细胞经实验化合物处理（即实验组F）。

③对照组：转染细胞不经处理，用以标准化结果（即对照组F）。

（2）计算结果：

实验组=实验组F-背景F。

对照组=对照组F-背景F。

表达倍数=实验组/对照组。

注意事项

1．酶促反应对温度较为敏感，加样检测前务必将所有试剂平衡至室温（20-25 ℃）再使用，使用完后剩余试剂需立即放回-20℃或-80℃保存，请勿长时间将试剂放置室温条件；

2．如果细胞裂解后不能立即对提取物进行检测，样品可以在冰上保存大约6h，在-80℃可保存数月。期间尽量避免反复冻融以保证酶活性；

3．在荧光素酶活性较高的情况下，导致信号超出线性范围（信号溢出）可用裂解液将样品进行稀释后再测试；

4．检测时需使用白色不透光或黑色的 96 孔板。如果使用普通透明的 96 孔板，相邻孔之间会产生相互干扰；

5．检测仪器：能检测化学发光的仪器都适用，但由于不同仪器的设置和灵敏度不同，测得的光信号值也会不同；

6．单管荧光测定仪测定，每个样品与测定试剂混合后到测定前的时间应保持一致；

7．萤火虫荧光素酶检测试剂中冻融后出现白色不溶物是属正常现象，不影响正常使用；

7．为了您的自身安全，实验前请做好有效防护；

8．本产品仅供科研使用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内!