产品规格

产品简介

萤火虫荧光素酶（Firefly luciferase）是一种分子量约为 61 kDa 的蛋白，在 ATP、镁离子和氧气存在的条件下，能够催化荧光素（luciferin）氧化成 oxyluciferin，在 luciferin 氧化的过程中会发出波长为 560 nm 左右的生物萤光，该萤光可通过化学发光仪进行测定。Firefly Luciferase reporter gene Assay Kit 具有灵敏度高的特点，可以高灵敏地检测萤火虫荧光素酶在细菌中的表达。

产品内容

保存条件

-80℃避光保存，至少一年有效；-20℃避光保存，推荐3-6个月内使用。首次解冻后建议适当分装检测试剂，避免反复冻融和长时间暴露于室温。

若检测试剂中出现少量沉淀，可平衡至室温并尽量溶解；如有不溶物可离心去除，不影响检测效果。

使用方法
1.表达萤火虫荧光素酶菌液的准备

挑取表达萤火虫荧光素酶的单克隆细菌，接种于含相应抗生素的LB培养基中，按适合您的表达系统进行培养和诱导。

注：同时设置不表达萤火虫萤光素酶的细菌作为阴性对照。

2.离心收集菌体

（1）取适量诱导后的菌液（建议1-5 mL），转移至1.5 mL或更大的离心管中。

（2）4°C，8000rpm 离心3-5分钟，沉淀菌体。

（3）小心弃尽上清，保留菌体沉淀

3.裂解细菌

（1）根据菌体沉淀量，加入适量细菌裂解液（对于1.5 mL离心管收集的菌体沉淀，建议加入100-200 μL裂解液，可根据菌体量适当调整裂解液用量。如荧光素酶表达水平较低，可减少裂解液用量以提高蛋白浓度。）

（2）用移液器反复吹打重悬菌体沉淀，充分混匀。

（3）室温静置裂解5-10分钟，或冰上裂解15-30分钟，期间可适当涡旋振荡以促进裂解。

4.检测试剂和仪器准备

（1）将萤火虫荧光素酶检测试剂从储存温度取出，平衡至室温后使用。

（2）按仪器操作说明书开启化学发光仪或具有检测化学发光功能的多功能酶标仪，根据仪器设备的要求并根据实验需要设置适当的间隔时间和测定时间。推荐测定曝光时间2-5s。

5. 加样与检测

每个样品测定时，取100 μL裂解液加入孔板中（保持每次样品的加样量一致），取等体积的细胞裂解液作为空白对照，另外加入100 μL萤火虫荧光素酶检测试剂，充分混匀后测定RLU（Relative light unit）（若使用384孔板，可等比例缩小加样量和检测试剂的量）。

6.结果分析

（1）实验设计：根据不同实验目的，在每个培养板中都应设置对照组、实验组和空白对照组。为了保证实验准确性，理论上每个实验组（包括对照组）都应当减去空白对照组的萤火虫荧光素酶的发光测量值。

①空白对照组：

背景F：未转染细菌+萤火虫荧光素酶检测试剂。

注：空白对照组的样品量必须与实验样品量相同，并加上完全相同的检测试剂。

②实验组：转染细菌经实验化合物处理（即实验组F）。

③对照组：转染细菌不经处理，用以标准化结果（即对照组F）。

（2）计算结果：

实验组=实验组F-背景F。

对照组=对照组F-背景F。

表达倍数=实验组/对照组。

注意事项

1．酶促反应对温度较为敏感，加样检测前务必将所有试剂平衡至室温（20-25 ℃）再使用；

2．如果细菌裂解后不能立即对提取物进行检测，样品可以在冰上保存大约6h，在-80℃可保存数月。不要反复冻融以避免酶活性的降低；

3．在荧光素酶活性较高的情况下，导致信号超出线性范围（信号溢出）可用裂解液将样品进行稀释；

4．检测时需使用白色不透光或黑色的 96 孔板。如果使用普通透明的 96 孔板，相邻孔之间会产生相互干扰；

5．检测仪器：能检测化学发光的仪器都适用，但由于不同仪器的设置和灵敏度不同，测得的光信号值也会不同；

6．单管荧光测定仪测定，每个样品与测定试剂混合后到测定前的时间应保持一致；

7．为了您的自身安全，实验前请做好有效防护；

8．本产品仅供科研使用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内!