试剂产品

产品规格

产品简介：

本试剂盒专为高纤维植物样本（如根、茎、木质化组织、药用植物根部等）设计的植物外泌体（植物囊泡）提取纯化试剂盒。针对此类样本细胞壁极度硬化、纤维网络致密、囊泡释放困难等核心痛点，本试剂盒通过定向破壁策略与分级除杂流程，精准瓦解高纤维植物组织的致密结构，实现囊泡的高效释放与纯净回收，提供从样本预处理到高纯度囊泡收获的一站式解决方案。

经试剂盒提取纯化所得外泌体可适用于TEM透射电镜形态鉴定、NTA粒径分布分析、核酸提取、蛋白质检测、细胞摄取及动物体内实验等多种研究场景。

 产品组成：

保存方法：

冰袋运输，不同组分按照说明书保存，特别注意Solution A 于-80 ℃ 保存，有效期一年。使用前4℃解冻，进行分装保存，避免反复冻融。

使用说明：

需自备实验材料和耗材：

（1）削皮刀；合适量程的榨汁机；电子天平；4℃高速离心机；水浴锅；

（2）50 mL 离心管;1.5mL EP 管若干；PBS；

一．样本预处理：

  (1）将新鲜的待提取植物块茎洗净外表皮后，称量10 g或适量样本，放入生物安全柜紫外消毒至少 20 min 后，将植物切成方便榨汁的小块（榨汁机需进行同样消毒处理）；

（2） 将切好的植物小块投入榨汁机榨汁，可适量加入Solution C等渗缓冲液（如10 g植物块茎可加入5 mLSolution C等渗缓冲液）稀释汁液增大流动性且保持组织细胞渗透压，榨汁直至无明显颗粒，收集具有流动性的植物汁液。

二．提取植物外泌体

（1) 酶解孵育：Solution A 试剂解冻溶解后，在稀释好的植物汁液中加入混匀的Solution A 试剂，按照植物汁液样本：Solution A 体积比2:1，如10 mL稀释后的植物汁液加入5 mL Solution A，涡旋混匀，混合液 37 ℃水浴孵育 6-8 h 左右，中途进行上下翻动混匀几次。

注：Solution A 试剂解冻需完全混匀溶解，植物汁液样本剂量为等渗液稀释后的体积，孵育时间可根据植物组织的纤维化进行延长，但后续延长孵育需置于4℃冰箱孵育。

（2）离心去杂：孵育完成的酶解混合汁液于 4℃，5,000 ×g，10 min 离心，收集上清；然后上清液再经4℃，10,000 ×g， 20-30 min 离心，收集上清；

（3）过滤浓缩：将收集的上清液依次经过1 μm滤膜和0.45 μm滤膜过滤后，使用100 KDa超滤管进行浓缩10倍处理。

注：超滤管滤膜一旦润湿后请保持湿润状态，超滤管使用方法见本司超滤管产品官网。

（4）提取试剂孵育：浓缩液加入Solution B试剂，按照浓缩后样本体积：Solution B 体积比4:1，如1 mL植物浓缩汁液加入0.25 mL Solution B，涡旋混匀，混合液于4℃过夜孵育 16h 左右。

注1：在进行外泌体的孵育沉降步骤前，必须要足够时间高速离心去除线粒体和大的蛋白聚集体，只留上清做后续沉淀。

注2：若Solution B结晶出现，将结晶的 Solution B 放入 37℃ 水浴箱中温育 10-20 分钟，并配合轻柔的磁力搅拌或涡旋助溶。

（5）高速沉淀外泌体：取孵育好的混合液于 4℃，12,000 × g，60min 离心，弃上清，将沉淀的外泌体使用1 mL 1xPBS重悬，先在4°C静置30分钟让沉淀自然软化，再用宽口枪头轻柔吹打，避免剧烈涡旋或超声，充分分散外泌体。然后将重悬液再次于 4℃，10,000 ×g，2 min 离心后，弃底部沉淀，保留上清液，此上清液为提取的外泌体。

注：若底部沉淀较多，可 12,000 ×g，2 min 离心多次至无明显沉淀，每次保留上清液。因不同植物色素吸附作用可能会出现带颜色沉淀，若对后续实验有影响，可全程低温操作减少色素吸附。

（6）纯化植物外泌体：将收获的植物外泌体粗品转入 Exosome Purification Filte（EPF 柱）内管中，于 4℃ 以 4,000 ×g 离心 10 min，离心后收集 EPF 柱管底 的液体，此液体即为纯化后的植物外泌体。以合适体积进行分装冻存于-80℃低温冰箱中，以备后续实验使用。

注意事项：

1．为了您的自身安全，实验前请做好有效防护。

2．Solution A 试剂静置有棕黄色沉淀，属于正常现象，使用前需混匀，切勿加热； Solution B静置也会有结晶出现，使用时放入 37℃ 水浴（切勿超过60℃）中温育10-20 分钟，并配合轻柔的涡旋。

3．超滤管的正确使用请参见本司超滤管产品官网产品介绍或说明书。

4．本产品仅供科研使用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内！