产品规格
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 售价 |
植物外泌体提取纯化试剂盒（多汁型） | EXP201 | 2T | 600 |
EXP202 | 10T | 2300 |
产品简介：
本试剂盒专为新鲜多汁植物样本（如果实、叶片、幼嫩茎尖等）设计的植物外泌体（植物囊泡）提取纯化试剂盒。针对多汁植物因含水量高、组织脆嫩，在榨汁过程中易发生酶促氧化褐变，同时汁液中富含多糖、酚类等干扰物，常规提取方法往往面临囊泡得率低、纯度不足核心痛点，本试剂盒通过先除杂、后释放的差异化工艺路线，有效规避多汁样本的氧化与干扰问题，实现囊泡的高效释放与纯净回收囊泡的一站式解决方案。
经试剂盒提取纯化所得外泌体可适用于TEM透射电镜形态鉴定、NTA粒径分布分析、核酸提取、蛋白质检测、细胞摄取及动物体内实验等多种研究场景。
产品组成：
组分名称 | EXP201/2T | EXP202/10T | 保存条件 |
Solution A | 10 mL | 50 mL | -80 ℃，1年有效 |
Solution B | 1 mL | 5 mL | 4 ℃，1年有效 |
70 μm过滤器 | 2 T | 10 T | 室温，2年有效 |
0.45 μm过滤膜 | 2 T | 10 T | 室温，2年有效 |
Exosome Purification Filter （EPF） | 2 T | 10 T | 室温，2年有效 |
100KDa超滤管 | 1 T | 2 T | 室温，2年有效 |
保存方法：
冰袋运输，不同组分按照说明书保存，特别注意Solution A 于-80 ℃ 保存，有效期一年。使用前4℃解冻，进行分装保存，避免反复冻融。
使用说明：
需自备实验材料和耗材：
（1）削皮刀；合适量程的榨汁机；电子天平；4℃高速离心机；水浴锅；
（2）50 mL 离心管；1.5mL EP 管若干；PBS；可能需要NaOH或NaHCO3
一．样本预处理：
（1）取新鲜多汁植物组织（果实、叶片等），去除不可用的果皮、果核及杂质，清洗后切成方便榨汁的小块，放入生物安全柜紫外消毒至少 20 min 后，；
（2）将切好的植物小块投入榨汁机榨汁，注意避免过度搅拌产生匀浆或打碎种子，也用粗筛网过滤掉大的组织碎片，收集植物汁液。
二．提取植物外泌体
（1）初步离心除杂：收集的植物汁液于 4℃，5,000 ×g， 15 min 离心，收集上清；然后经过70 μm筛网过滤，得到粗滤液。
（2）预中和（根据植物汁液酸碱性选做）：测量粗滤液pH，使用弱碱将粗滤液pH调至4.5-5.5左右。注：柑橘类（如柠檬）汁液pH值过低（2-4）会导致后面孵育步骤失效，需调节pH。调节pH时严禁直接加入高浓度碱液，以免局部过碱导致蛋白变性或果胶沉淀。若条件允许，建议加入适量 0.1 M 柠檬酸钠缓冲液以维持酶解过程中的pH稳定。
（3）Solution A 试剂解冻溶解后，在初步除杂后植物汁液粗滤液中加入混匀的Solution A 试剂，按照植物汁液样本：Solution A 体积比2:1，如10 mL植物汁液加入5 mL Solution A，涡旋混匀，混合液 37 ℃水浴孵育 6-8 h 左右或4℃过夜延长孵育（易氧化），中途进行上下翻动混匀几次。
稀释后样本体积 | Solution A 试剂体积 |
10 mL | 5 mL |
20 mL | 10 mL |
注：Solution A 试剂解冻需完全混匀溶解，孵育时间可根据植物结构，酶解中汁液粘稠度调整延长。针对苹果等易氧化褐变的植物样本，建议在榨汁时提前将样本预冷，并在4℃冰浴或避光环境中进行榨汁与酶解孵育，以最大程度减少多酚氧化造成的色素干扰。
（4）高速离心除杂：孵育完成的酶解混合汁液于 4℃，10,000 ×g， 20 -30min 离心，收集上清；
（5）过滤浓缩：将收集的上清液依次经过0.45 μm滤膜过滤后，使用100 KDa超滤管进行浓缩10倍处理。
注：如果离心和过滤膜未正确操作，上清液仍含有大量杂质会堵塞滤膜，请增大离心时间，再次过滤膜再进行浓缩；超滤管滤膜一旦润湿后请保持湿润状态，超滤管使用方法见本司超滤管产品官网。
（6）提取试剂孵育：将结晶的 Solution B 放入 37℃ 水浴温育 10-20 分钟，并配合轻柔涡旋至澄清，浓缩液加入Solution B，按照浓缩后样本体积：Solution B 体积比4:1，如1 mL植物浓缩汁液加入0.25 mL Solution B，涡旋混匀，混合液于4℃过夜孵育 16h 左右。
稀释后样本体积 | Solution B 试剂体积 |
1mL | 0.25 mL |
2 mL | 0.5 mL |
（7）高速沉淀外泌体：取孵育好的混合液于 4℃，12,000 × g，60min 离心，弃上清，将沉淀的外泌体使用1 mL PBS重悬，枪头反复吹打，若难重悬，在4℃或室温静置15-30分钟再进行吹打分散，也可冰浴超声数秒，切不可长时间超声，破坏外泌体结构。将重悬液再次于 4℃，10,000 ×g，2 min 离心后，弃底部沉淀，保留上清液，此上清液为提取的外泌体。
注：若底部沉淀较多，可 12,000 ×g，2 min 离心多次至无明显沉淀，每次保留上清液。
（8）纯化植物外泌体：将收获的植物外泌体粗品转入 Exosome Purification Filte（EPF 柱）内管中，于 4℃ 以 4,000 ×g 离心 10 min，离心后收集 EPF 柱管底 的液体，此液体即为纯化后的植物外泌体。以合适体积进行分装冻存于-80℃低温冰箱中，以备后续实验使用。
注意事项：
1．为了您的自身安全，实验前请做好有效防护。
2．Solution A 试剂静置有棕黄色沉淀，属于正常现象，使用前需混匀，切勿加热； Solution B静置也会有结晶出现，使用时放入 37℃ 水浴（切勿超过60℃）中温育10-20 分钟，并配合轻柔的涡旋。。
3．超滤管的正确使用请参见本司超滤管产品官网产品介绍或说明书。
4．因部分植物极易氧化褐变，建议榨汁和酶解过程尽量在避光或低温下进行
5．本产品仅供科研使用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内！