试剂产品

产品规格

产品简介：

本动物组织外泌体提取纯化试剂盒专为高效分离纯化各类动物组织中（包括脑、心、肝、肺、肌肉、脾、肿瘤等）的外泌体。采用创新的“温和消化+高效沉淀”两步法体系，通过精准配比的复合酶在温和条件下快速释放外泌体，告别传统超速离心法步骤繁琐、耗时长的痛点，能有效去除杂蛋白与细胞碎片，确保提取的外泌体纯度高、粒径均一且结构完整。

经试剂盒提取纯化所得外泌体可适用于TEM透射电镜形态鉴定、NTA粒径分布分析、核酸提取、蛋白质检测、细胞摄取及动物体内实验等多种研究场景。

产品组成：

保存方法：

冰袋运输，不同组分按照说明书保存，特别注意组织消化液 A，B，C于-80 ℃ 保存，有效期一年。使用前4℃解冻，进行单次使用量分装后-80 ℃保存，避免反复冻融。

使用说明：

需自备实验材料和耗材：

（1）无菌培养皿，眼科剪子； 15mL 离心管；50 mL 离心管

（2）10% FBS 的预冷培养基/PBS； 1xPBS

一．样本预处理：

（1）组织清洗和剪碎：取新鲜动物组织，将 0.1 g 新鲜组织放入预冷的 PBS 中清洗 2-3 次，彻底洗去残留血液（血液中的核酸酶会破坏外泌体）。将组织转移至无菌培养皿中，用无菌眼科剪将其剪成 1 mm³ 左右的微小碎块，剪碎过程中可滴加极少量预冷的 PBS 保持组织湿润。注：碎块剪的越小，消化速率及细胞得率越高。

二．组织消化

（1）消化液配置：取已经分装的单次使用量的组织消化液 A，B，C液，4℃解冻并混合均匀。每0.1g组织对应组织消化液 A，B，C混合配置量如下表；

注：消化液组分可按单次使用量分装保存，避免反复冻融。配置的消化液需现配现用，避免长时间室温放置。

（2）组织孵育消化：将剪碎的组织转移至 15 mL 离心管中，加入刚刚配置的上述消化工作液（确保液体完全浸没组织块），置于 37℃ 恒温摇床中孵育30 min-1 h，每隔 5-10 分钟，取出离心管，用移液枪轻柔吹打 3-5 次（或轻轻摇晃），帮助组织进一步散开。

注：孵育消化时间与组织剪碎程度，组织来源不同有关；建议消化时间：软组织（如肝、脾、肾）约 30 分钟；硬组织（如肿瘤、肌肉）约 45-60 分钟；孵育时间尽量不超过2小时，防止过度消化破坏外泌体；

（3）终止消化：当肉眼观察组织块基本消失，液体呈现均匀的浑浊糊状时，说明消化完成；立即加入等体积含有 10% FBS 的预冷培养基（或10% FBS 的PBS），轻柔混匀。血清中的蛋白可以迅速中和并终止胶原酶的活性，防止过度消化破坏外泌体。

（4）过滤除杂：将悬液通过 70 μm 过滤网过滤到新的 50 mL 离心管中收集滤液；滤液于 4℃，3,000 ×g，20 min 离心，收集上清；然后上清液再经4℃，10,000 ×g， 20-30 min 离心，收集上清。

三．外泌体提取纯化

（1）向上述上清液加入混匀的Solution D试剂，按照上清液体积：Solution D 体积比4:1，如2 mL上清液加入0.5 mL Solution D，上下颠倒离心管 5-10 次，直到液体变得均匀，混合液于4℃过夜孵育。

注：若Solution D结晶出现，将结晶的 Solution D放入 37℃ 水浴箱中温育 10-20 分钟，并配合轻柔的磁力搅拌或涡旋助溶

（2）高速沉淀外泌体：取孵育好的混合液于 4℃，10,000 × g，30min 离心，在管底或管壁一侧通常能看到乳白色或半透明的胶状沉淀，弃上清，尽可能吸干上清液。也可选择再一次将4℃，1000 ×g 离心 1 分钟。用微量移液器小心吸弃残留的液体。沉淀的外泌体使用0.5 mL 1xPBS重悬，先在4°C静置30分钟让沉淀自然软化，再用宽口枪头轻柔吹打，避免剧烈涡旋或超声，充分分散外泌体。

（3）纯化泌体：将收获的外泌体粗品转入 Exosome Purification Filte（EPF 柱）内管中，于 4℃ 以 4,000 ×g 离心 10 min，离心后收集 EPF 柱管底 的液体，此液体即为纯化后的外泌体。以合适体积进行分装冻存于-80℃低温冰箱中，以备后续实验使用。

 注意事项：

1．为了您的自身安全，实验前请做好有效防护。

2．若Solution D结晶出现，将结晶的Solution D放入 37℃ 水浴箱中温育 10-20 分钟，并配合轻柔的磁力搅拌或涡旋助溶。

3．组织消化液ABC组分可按单次使用量分装保存，避免反复冻融。配置的消化液需现配现用，避免长时间室温放置

4．本产品仅供科研使用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内！