试剂产品

产品规格：

产品简介：

  PKH67是一种亲脂性绿色荧光染料（红色，Ex/Em : 490nm，502nm），脂肪族尾部可以迅速嵌入暴露的细胞膜脂质双层并形成强的非共价相互作用，可用来标记追踪体内外的多种细胞，结构上带有更长的脂肪族碳尾，能稳定插入细胞膜脂质区域。PKH67具有比PKH2更低的细胞-细胞间转运发生。PKH67的体内荧光半衰期为10-12天左右。PKH67适用于需要绿色荧光细胞连接染料的短-中期体内示踪研究，以及体外细胞毒性，细胞增殖监测分析，也能用于监测外泌体或脂质体吞噬，细胞-细胞膜转运、吞噬、抗原递呈，以及体内细胞运输研究。

  本产品以试剂盒提供，包括PKH67母液和专用稀释液C（Dilution C）形式提供，适用于常规细胞膜染色，该试剂盒配备的溶剂可以在染色过程中，最大化增加染料溶解度和染色效率，同时维持细胞活力，Dilution C与哺乳动物细胞等渗，且不含去垢剂或有机溶剂，也不含生理盐水和缓冲盐；PKH67也可用于外泌体的标记与示踪，详情见外泌体染料产品。

产品组成及保存条件：

 注：①PKH67母液以乙醇溶剂形式提供，严格避光并拧紧盖子，防止溶剂挥发，减少反复冻融次数。可根据单次用量分装保存；②保存在Dilution C的染色工作液，需在使用前配置，且现配现用

使用方法：

1.工作液准备

试剂盒配备的是1 mM（EtOH）的母液，使用前检查是否结晶，若有结晶，超声或涡旋直至完全溶解后离心片刻，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失；可根据单次用量（10 μL）分装保存，分装后的母液存储在-20 ℃或-80 ℃，避免反复冻融。取适量母液使用试剂盒的Dilution C将PKH67母液进行200-500倍稀释（2-5 μM），配制成染色工作液。例如，取4 μL母液至1 mL Dilution C 稀释为4 μM工作液备用。

注：保存在的染色工作液的染料，需在使用前配置，且现配现用。

2.悬浮细胞染色

1)      悬浮细胞准备：使用适量的Dilution C工作液重悬细胞，染色细胞浓度可尝试1×10⁶-10⁷/mL，例如1 mL的Dilution C重悬2×10⁶个细胞，轻轻吹匀以确保完全分散。

注：确保细胞悬液中不含血清，钙镁离子等影响PKH26充分溶解的物质。

2)      孵育细胞：向上述细胞悬浮液加入适量工作液，使其体系PKH终浓度配制浓度为1～5 μM，在室温或37 ℃环境避光孵育细胞，不同的细胞最佳培养时间不同。建议首次孵育细胞5 min，之后可优化孵育时间，以得到均一的标记结果。例如1 mL的Dilution C重悬2×10⁶个细胞后，加入1 mL的4 μM工作液，得到1×10⁶/mL密度，PKH67工作终浓度为2 μM，总体积2 mL的工作体系。

注：① PKH67标记终浓度需根据不同细胞类型，孵育时间等实验体系通过预实验进行优化；②染色体系体积避免在很小(<100 μL)或很大(>5 mL)的体积下进行染色；③较长的细胞孵育可能引起某些细胞类型活力降低，根据不同细胞状态和染色程度适当调整孵育时间和工作液终浓度；

3)      清洗多余染料：孵育结束，可以加入等体积染色终止液(如2 mL)或其他适当蛋白溶液(比如1% BSA)，孵育1min结合多余的探针，以800 -1000 rpm离心细胞10 min，小心去除上清液，使用完全培养基重悬，重复清洗2遍，注意缓慢操作。

3.贴壁细胞的染色

1)      将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。

2)      从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，将盖玻片放在潮湿的环境中。

3)      在盖玻片的一角加入适当体积（500 μL）的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。

4)      以相同悬浮细胞的孵育条件进行孵育，及孵育时间优化。

5)      吸干染料工作液，用培养液或缓冲液清洗盖玻片3次以上。

注：本方案仅供参考，具体实验条件请研究人员依据自身项目进行优化。

4.外泌体的染色请参见外泌体产品系列试剂盒

注意事项

1)   为了您的自身安全，实验前请做好有效防护；

2)      PKH67母液易水解，建议分装保存，分装后用封口膜密封保存，存储在-20 ℃或-80 ℃，避免反复冻融；

3)      最佳染色的工作液浓度与细胞系和实验体系有关，可多次尝试染色实验优化，且工作液现配现用；

4)      荧光染料均存在淬灭问题，操作和储存过程中需注意避光，以减缓荧光淬灭。

5)    本产品仅供科研使用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内！